ELISA實驗洗滌技術(shù)要點

1. 手工洗板：
操作步驟：每次反應(yīng)溫育后，將反應(yīng)液吸出或甩干，然后在板孔中加滿洗液，放置2～3分鐘，再將洗液吸出或甩干并用吸水紙拍干。重復(fù)洗滌3～4次，最后拍干。
注意事項：

1. 洗液量：加入的洗液量應(yīng)以剛滿反應(yīng)孔為限，避免孔口內(nèi)有游離酶未洗凈。

2. 避免孔間污染：吸液或甩干時要垂直，避免交叉感染。

3. 吸水紙：使用一次性吸水紙，選擇不易脫落碎屑的材質(zhì)。

4. 拍干：拍干時用力要輕，避免抗原抗體復(fù)合物脫落，且時間應(yīng)盡量短以防止酶失活。

2. 洗板機(jī)洗板：
優(yōu)勢：速度快，條件恒定，人為因素少。
操作要點：

1. 洗滌參數(shù)：確保所有反應(yīng)孔的洗滌量相同，通常建議使用350μl洗滌液進(jìn)行洗滌。

2. 洗滌次數(shù)：一般要求洗滌4～5次，過多或過少都會影響結(jié)果，過多可能降低信號強(qiáng)度，過少則可能增加假陽性。

3. 吸液高度：調(diào)整吸液高度，避免殘留過多未結(jié)合物。

4. 吸頭類型：浮動洗頭可自動調(diào)整，剛性洗頭需要精確調(diào)整吸液高度。

3. 洗板技術(shù)：
洗滌量：根據(jù)試劑盒推薦，調(diào)整至足夠覆蓋整個反應(yīng)孔壁的量。
吸液操作：垂直倒液，迅速、干脆，避免手腕左右搖擺或旋轉(zhuǎn)。
殘留液體：殘留量越少，背景信號越低，但需避免吸頭壓得太緊導(dǎo)致吸液效率降低。

4. 洗液配方：
非離子型洗滌劑：如吐溫20，濃度在0.05%～0.2%之間，過高會解吸附抗原或抗體。
流水沖洗：適用于微量滴定板，增加水流量或水壓可增強(qiáng)洗滌效果，但需注意防止孔間污染。

5. 洗滌緩沖液：
配制：使用新鮮無污染的蒸餾水或去離子水配制，避免結(jié)晶影響。
使用：現(xiàn)配現(xiàn)用，確保洗液新鮮。

6. 洗滌后的處理：
拍干：拍干后應(yīng)盡快進(jìn)行下一步操作，減少暴露時間以防止酶失活。
板布局：記錄每次洗滌的順序，確保每個孔的顯色時間一致。